Методы амплификации нуклеиновых кислот (МАНК) обладают наибольшей на сегодняшний день аналитической чувствительностью и позволяют выявлять инфекционного агента даже при его минимальном содержании в биологическом материале. Самым широко используемым МАНК является полимеразная цепная реакция (ПЦР). Согласно рекомендациям ВОЗ, «золотым стандартом» метода выявления SARS-CoV-2 в острой фазе инфекции является полимеразная цепная реакция (ПЦР) с обратной транскрипцией в реальном времени (ОТ-ПЦР). Первичная репликация вируса SARS-CoV-2 происходит в эпителии слизистой оболочки верхних дыхательных путей. В этих местах вирусная нагрузка достигает пика в течение первой недели после появления симптомов, а затем снижается^1,2. Сверхчувствительность ПЦР-теста требует соблюдения строжайших правил работы с материалом и оснащения лаборатории. Если в процессе подготовки к проведению тестирования образец будет загрязнен — возможно «ложное срабатывание».

Ложноположительные результаты ПЦР-теста могут появиться при наличии в крови пациента так называемых «перекрестно-реагирующих» антител, сходных по своим иммунохимическим свойствам со специфическими антителами (других коронавирусов, ревматоидным фактором IgM).

Ложноотрицательные результаты могут быть получены при исследовании биологических образцов, взятых на досимптомном этапе развития инфекции, или при применении наборов реагентов (тест-систем) с низким уровнем чувствительности. Ложноотрицательные результаты также могут быть получены при обследовании пациентов со сниженным иммунитетом².

Предполагаемая динамика маркеров при инфицировании SARS-CoV-2³

К недостаткам ПЦР-тестирования можно отнести срок получения результатов до 48 часов, что не позволяет оперативно изолировать заболевшего. Помимо лабораторного метода ПЦР используются менее чувствительные экспресс-тесты на выявление антигена SARS-CoV-2, которые позволяют получить результат в течение 10-30 минут. Преимуществом экспресс-тестирования является возможность²:

• Быстрого принятия решения о самоизоляции и карантине для снижения риска дальнейшего распространения инфекции
• Проведения скрининга лиц после подтвержденного контакта с человеком, инфицированным SARS-CoV-2
• Расширения диапазона и объема тестирования, например, в сельских районах/местах со слаборазвитой инфраструктурой

Следует учитывать, что тесты разных производителей различаются по способности выявлять инфекцию. Под понятием чувствительности теста понимают возможность поставить правильный диагноз инфицированному пациенту, а специфичность – это возможность правильно выявить неинфицированного пациента. Поэтому даже получение отрицательного результата теста на антиген не всегда исключает факт инфицирования².

Необходимо также дифференцировать новую коронавирусную инфекцию с гриппом, острыми респираторными вирусными инфекциями, вызываемыми риновирусами, аденовирусами, РС-вирусом, метапневмовирусами человека, MERS-CoV, вирусом парагриппа, вирусными гастроэнтеритами, бактериальными возбудителями респираторных инфекций, туберкулезом².

У заболевшего и/или переболевшего пациента с подтвержденным диагнозом COVID-19 выполняют высокоспецифичные тесты для оценки иммунного ответа на текущую или перенесенную инфекцию. При инфицировании SARS-CoV-2 в организме хозяина обычно возникает иммунный ответ против вируса, включающий образование специфических антител к антигенам вируса: IgМ и IgG. IgМ-антитела производятся первыми, их уровень быстро нарастает в начале инфекции, достигая максимума в острый период болезни, а затем постепенно снижается, полностью исчезая в течение нескольких месяцев. IgG- антитела появляются в крови в острой стадии инфекционного процесса. Для новой коронавирусной инфекции характерно практически одновременное появление антител IgМ и IgG. Время до сероконверсии (образования антител) составляет от двух дней до двух недель после появления первых симптомов².

Выявление определенных иммуноглобулинов и их концентрация отражают течение инфекционного заболевания

К недостаткам тестирования на антитела относится возможность получения отрицательного результат теста при не исключенном наличии инфицирования. Образцы сыворотки крови, отобранные в раннем периоде, могут давать отрицательные результаты. Также у существенной части пациентов с подтвержденным ПЦР- диагнозом COVID-19 специфические антитела не обнаруживаются. У части выздоровевших гуморальный иммунный ответ является относительно кратковременным.

Легкое течение COVID-19 в амбулаторных условиях не требует дополнительных лабораторных исследований. Во время госпитальной терапии пациентов с COVID-19 для поддержки принятия клинических решений необходимо изучать взаимосвязь повреждения сердца, воспаления и гиперкоагуляции как предикторов исхода при COVID-19. С-реактивный белок (СРБ) коррелирует с тяжестью течения, распространенностью воспалительной инфильтрации и прогнозом при пневмонии и соответствует концентрации интерлейкина-6 (ИЛ-6) в крови. Такие тесты могут применяться в качестве раннего маркера острого воспаления при выборе тактики ведения пациентов в критическом состоянии. Для ранней диагностики клинически значимых бактериальных инфекций также оценивают уровень прокальцитонина: < 0,5 мкг/л – низкий риск бактериальной коинфекции и неблагоприятного исхода, при более высоких значениях вероятна бактериальная коинфекция².

'

'

'

Все зарегистрированные в Российской Федерации диагностические наборы реагентов для выявления РНК SARS-CoV-2 и антигенов коронавируса представлены в Государственном реестре медицинских изделий. В настоящее время продолжаются исследования по разработке инновационных молекулярно-биологических методик, что позволит существенно расширить возможности и точность своевременной диагностики вирусной инфекции.